ВЫСОКОЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЛЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ - Баршевская, Л.В.; Зверева, Е.А.; Еремин, С.А.; Жердев, А.В.; Дзантиев, Б.Б. (Eurasian Journal of Applied Biotechnology, 2024)
Иммунохроматографический анализ (ИХА) – перспективный метод определения аналитов различной природы, который отличается экспрессностью и простотой проведения. Одним из основных недостатков ИХА являются высокие показатели предела обнаружения (ПрО), которые могут не соответствовать нормативам о контролируемых предельно допустимых уровнях содержания того или иного соединения. Соответственно, востребованы разработки высокочувствительных тест-систем. В представленной работе для определения низкомолекулярных аналитов – пестицидов 2,4-дихлорфеноксиуксусной кисоты (2,4-Д) и имидаклоприда – разработаны системы конкурентного ИХА с непрямым мечением антител. Использование данного подхода позволяет независимо варьировать концентрации специфических антител в пробе и используемого коллоидного маркера, тем самым одновременно обеспечивая эффективную конкуренцию и высокий уровень регистрируемого окрашивания. В ходе разработки тест-систем были синтезированы наночастицы золота и получены их конъюгаты с антивидовыми антителами. Проведена характеристика полученных препаратов методом просвечивающей электронной микроскопии (среднее значение размера наночастиц – 20,83 ± 5,05 нм, минимальное значение – 10,43 нм, максимальное значение – 27,67 нм, степень эллиптичности 1,12 ± 0,08). Исследованы зависимости аналитических характеристик тест-систем (ПрО, интенсивность сигнала в аналитической зоне) от таких показателей, как концентрация используемого маркера (ОП от 1,0 до 2,0), концентрация свободных специфических антител (от 20 до 200 нг/мл), концентрация иммобилизуемого в аналитической зоне конъюгата гаптен-белок (от 0,5 до 2 мг/мл). В выбранных условиях проведена сравнительная характеристика стандартной конкурентной схемы ИХА и предложенного подхода. Показано, что схема с непрямым мечением антител обеспечивает более чувствительное выявление целевых аналитов (снижение ПрО до 20 раз). Таким образом, разработанный подход может найти применение в иммунохроматографических тест-системах для своевременного и эффективного контроля пищевой продукции на содержание пестицидов. Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант № 24-43-00196.