ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЛИПОПОЛИСАХАРИДНОМУ АНТИГЕНУ САЛЬМОНЕЛЛ - Тургимбаева, А.М.; Каукабаева , Г.К.; Бакирова , Г.А. (Eurasian Journal of Applied Biotechnology, 2013)
На предыдущих этапах работы из бактериальных масс S. typhimurium и S. enteritidis методом водно-фенольной экстракции по O. Westphal получили липополисахаридный антиген. Выход антигена в зависимости от количества бактериальной массы составил от 0,750 до 1,5 мг. Данная методика выделения липополисахарида позволяла получать достаточно чистые углеводы. Результаты окрашивания серебром ПААГ четко показывают ступенчатую модель полос с несколькими ступенями, что говорит о гладком типе грамотрицательных бактерий. Результаты окрашивания полиакриламидного геля красителем Кумасси показало отсутствие контаминирующих бактериальных белков. Полученный ЛПС антиген обладает достаточно высокой антигенной активностью. Схема иммунизации концентрацией антигена 50 мкг/мл способствует выработке достаточного количества сывороточных антител с высокой степенью их сродства к использованному антигену. Использованная схема иммунизации мышей линии BALB/c липополисахаридными антигенами S. typhimurium и S. enteritidis пригодна для стимулирования иммунной системы подопытных животных на выработку достаточного количества антител против использованных антигенов. Титры специфических антител в сыворотке крови мышей, иммунизированных ЛПС антигеном S. typhimurium и S. enteritidis, в ИФА достигали 1:25600 и 1:12800 соответственно. Гибридизацию лимфоцитов мышей с миеломными клетками линии X63-Ag8.653 проводили в присутствии ПЭГ-4000. Выход клонов гибридом, обладающих антительной продуктивностью, в наших опытах находился в пределах 6,41–7,62%, что свидетельствует о довольно высоком иммунном фоне пула лимфоцитов и о возможности изолирования активных клонов с желаемыми свойствами. Таким образом, методом гибридомной технологии получены активные штаммы гибридных клеток, стабильно синтезирующих моноклональные антитела к липополисахаридным антигенам S.typhimurium и S.enteritidis.